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幽門(mén)螺旋桿菌的高敏高精檢測(cè)方法
2023-03-24昀冠科學(xué)商城新聞編輯
中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院李志遠(yuǎn)團(tuán)隊(duì)通過(guò)環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）結(jié)合最新的CRISPR/Cas12a技術(shù)，提出針對(duì)高致病性幽門(mén)螺旋桿菌菌株的高敏感度檢測(cè)方法。
中國(guó)科學(xué)院廣州生物醫(yī)藥與健康研究院李志遠(yuǎn)團(tuán)隊(duì)通過(guò)環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）結(jié)合最新的CRISPR/Cas12a技術(shù)，提出針對(duì)高致病性幽門(mén)螺旋桿菌菌株的高敏感度檢測(cè)方法。該方法僅需檢測(cè)唾液樣本，便可快速精準(zhǔn)檢測(cè)出感染該菌株的陽(yáng)性病人。近日，相關(guān)研究成果以Harnessing enhanced CRISPR/Cas12a trans-cleavage activity with extended reporters and reductants for early diagnosis of Helicobacter pylori, the causative agent of peptic ulcers and stomach cancer為題，發(fā)表在Biosensors and Bioelectronics上。
幽門(mén)螺桿菌感染是慢性胃炎、消化性潰瘍的主要致病因子，且與胃癌、胃黏膜相關(guān)淋巴組織（MALT）淋巴瘤等疾病密切相關(guān)。多數(shù)幽門(mén)螺桿菌感染者遵醫(yī)囑進(jìn)行多聯(lián)療法可根治，但多數(shù)感染患者早期幾乎無(wú)癥狀，易被忽視。此外，并非所有幽門(mén)螺桿菌感染者均會(huì)發(fā)病，具有細(xì)胞毒素相關(guān)蛋白（CagA）和空泡毒素（VacA）表達(dá)的菌株才是胃部炎癥、潰瘍及胃癌的相關(guān)菌株。因此，臨床上迫切需要快速、精準(zhǔn)、高特異性和高靈敏度的現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)方法，來(lái)幫助預(yù)防高致病性幽門(mén)螺桿菌的傳播、對(duì)已患病人群的實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和診斷。
目前，臨床幽門(mén)螺桿菌的檢測(cè)方法主要依賴(lài)組織學(xué)或幽門(mén)螺桿菌培養(yǎng)、UBT（13C或14C-尿素呼氣試驗(yàn)）和血清學(xué)檢測(cè)，但這些方法因具有明顯的缺點(diǎn)而影響推廣應(yīng)用。相比而言，李志遠(yuǎn)團(tuán)隊(duì)采用的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）技術(shù)已被證明比PCR更敏感（100倍），并在恒溫（65℃）下使用簡(jiǎn)單的水浴就可快速獲得檢測(cè)結(jié)果。另外，研究顯示，結(jié)合CRISPR/Cas技術(shù)可進(jìn)一步提高其檢測(cè)靈敏度，并減少非特異性擴(kuò)增。具體而言，該方法通過(guò)新型優(yōu)化擴(kuò)展ssDNA報(bào)告基因加上新型緩沖體系優(yōu)化CEXTRAR來(lái)顯著提高LbCas12a的反切活性，并使檢測(cè)靈敏度提高了16倍，同時(shí)，無(wú)需目標(biāo)預(yù)擴(kuò)增即可實(shí)現(xiàn)皮摩爾靈敏度，可用于臨床唾液樣本的高致病性幽門(mén)螺桿菌的早期檢測(cè)。結(jié)合LAMP技術(shù)，使用三種檢測(cè)手段，CEXTRAR均可獲得極高靈敏度的CagA和VacA的檢測(cè)效果，分別為實(shí)時(shí)熒光（43 aM和96 aM），管內(nèi)熒光（430 aM和960 aM）和橫向側(cè)流讀數(shù)（4.3 aM和9.6 aM）。研究通過(guò)傳統(tǒng)的13C-尿素呼氣試驗(yàn)和PCR對(duì)CEXTRAR方法進(jìn)行對(duì)比測(cè)試，發(fā)現(xiàn)CEXTRAR可檢測(cè)到13C尿素呼氣試驗(yàn)的假陰性結(jié)果。
相比于傳統(tǒng)的幽門(mén)螺桿菌檢測(cè)方法，該方法具有更簡(jiǎn)便、快速、廉價(jià)的特點(diǎn)，并具有更高的靈敏度和特異性，將在廣大人群的高致病性幽門(mén)螺桿菌的檢測(cè)、治療以及相關(guān)疾病如胃炎、胃潰瘍和胃癌的發(fā)生和改善預(yù)后等方面發(fā)揮重要作用。
用于幽門(mén)螺旋桿菌實(shí)時(shí)熒光和比色監(jiān)測(cè)的CEXTRAR平臺(tái)工作示意圖
滬公網(wǎng)安備31011502401370
