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ELISA試劑盒檢測原理
2021-05-26昀冠科學(xué)商城新聞編輯
ELISA試劑盒檢測原理
免疫測定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),所以任何優(yōu)質(zhì)的診斷試劑離不開優(yōu)質(zhì)的原料,如抗原抗體,酶等。以前用于免疫測定的抗原通常為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體,而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過各種化學(xué)合成方法制備。
隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑,各種新型使用的測定方法也不斷出現(xiàn)。
ELISA生物檢測方法具有敏感度高，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。ELISA生物檢測試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便，結(jié)果判斷較客觀等因素，已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢驗(yàn)的各領(lǐng)域中。
ELISA的基本原理有三條：
（1）抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫學(xué)活性；
（2）抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性；
（3）酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。
目前市面上的ELISA試劑盒檢測原理主要有以下四種：直接法，間接法，夾心法，競爭法。
ELISA試劑盒評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：
① 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，應(yīng)大于等于0.9900。
② 靈敏度：反應(yīng)試劑盒的最低檢測濃度
③ 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
④ 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)
⑤ 回收率：判斷實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和特異性
ELISA試劑盒液體類標(biāo)本:包含血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培育上清等。昀冠科學(xué)商城友情提醒：ELISA試劑盒在搜集樣本前需要有一個(gè)完好的方案，確定檢測的成份是否穩(wěn)定。
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