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生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)的基本操作
2024-01-26昀冠科學(xué)商城新聞編輯
一般操作技術(shù)
1、混勻法：欲使一化學(xué)反應(yīng)充分進(jìn)行，必須使反應(yīng)體系內(nèi)各種物質(zhì)迅速地相互接觸，因此除特別規(guī)定外，一般都需要將反應(yīng)物徹底混勻?；靹蚍绞酱笾掠幸韵聨追N，可隨使用的器皿的液體容量而選用。
（1）旋轉(zhuǎn)混勻法：手持容器作離心旋轉(zhuǎn)，適用以未盛滿液體的試管或小口器皿，如三角瓶等。
（2）彈指混勻法：左手持試管使之直立，以右手食指輕擊試管之下部，使管內(nèi)溶液作旋轉(zhuǎn)流動(dòng)。
（3）倒轉(zhuǎn)混勻法：適用于有玻璃塞的瓶子，如容量瓶等。
（4）彈動(dòng)混勻法：以右手大拇指、食指、中指握住試管上部，將試管放平，于左手掌中彈動(dòng)。
（5）吸管混勻法：用吸管將溶液反復(fù)吸放數(shù)次，適用于量少而無(wú)沉淀的液體。
（6）攪拌混勻法：適應(yīng)燒杯等大口容器所盛之溶液的混勻，一般在配制混合試劑時(shí)，用玻棒攪拌以助溶，或混勻大量的溶液。
2、保溫與加熱：為使某一化學(xué)反應(yīng)在一定的溫度下進(jìn)行，常需要保溫；為促進(jìn)或停止化學(xué)反應(yīng)，有時(shí)需要加熱。
（1）保溫：常用恒溫箱或恒溫水浴進(jìn)行，后者的溫度較前者穩(wěn)定。
（2）加熱：加熱常用兩種方法，一是直接把試管、燒杯等器皿在酒精燈、電爐或煤氣火焰上加熱；二是在水浴中加熱或煮沸，應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)的目的而定。
3、過(guò)濾：過(guò)濾的目的是將沉淀與液體分開(kāi)，可用濾紙、棉花、紗布等。生化實(shí)驗(yàn)中所進(jìn)行的過(guò)濾，為了不改變?nèi)芤旱臐舛?，一般不要用水濕?rùn)濾紙。過(guò)濾所用的濾紙常摺成多摺狀，以增大過(guò)濾面積。當(dāng)過(guò)濾難濾之物或?yàn)榱思涌焖俣龋刹捎脺p壓抽濾法。實(shí)驗(yàn)室中有時(shí)用離心法代替過(guò)濾。
實(shí)驗(yàn)樣品的制備在生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中，無(wú)論是分析組織中各種物質(zhì)的含量，還是研究組織中物質(zhì)代謝的過(guò)程，皆需利用特定的生物樣品。為了達(dá)到一定的實(shí)驗(yàn)?zāi)康模枰獙@得的樣品預(yù)先做適當(dāng)?shù)奶幚?。掌握?shí)驗(yàn)樣品的正確處理方法乃是做好生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)的先決條件。基礎(chǔ)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中，最常用的動(dòng)物或人體樣品是全血、血清、血漿及無(wú)蛋白血濾液。組織樣品則常用肝、腎、胰、胃粘膜或肌肉等，實(shí)驗(yàn)時(shí)可制成組織勻漿、組織糜、組織切片或組織浸出液等形式。有關(guān)這些組織樣品的制備方法，扼要介紹如下：
（一）血液樣品全血：無(wú)論是收集動(dòng)物還是人的血液，均應(yīng)注意儀器的清潔與干燥，同時(shí)也要及時(shí)加入適當(dāng)?shù)目鼓齽┮苑乐寡旱哪?。一般在血液取出后，迅速盛于含有抗凝劑的器皿中，同時(shí)輕輕搖動(dòng)，使血液與抗凝劑充分混合，以免形成小凝塊。取得全血如不立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，應(yīng)儲(chǔ)存于冰箱內(nèi)。常用的抗凝劑有草酸鹽、檸檬酸鹽、氟化鈉及肝素等，可視實(shí)驗(yàn)要求而選用。一般實(shí)驗(yàn)用草酸鹽即可，但它不適用于血鈣測(cè)定。氟化鈉因兼有抗凝及抑制糖酵解之作用，故可用于血糖測(cè)定。但因其也能抑制脲酶，故用脲酶測(cè)定尿素時(shí)，則不能應(yīng)用。肝素雖好，但價(jià)格較貴。
抗凝劑的用量不應(yīng)過(guò)多，否則影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。通常每毫升血液加1~2mg草酸鹽或5mg檸檬酸鈉或5~10mg氟化鈉，肝素僅需要0.01~0.2mg，最好抗凝劑制成適當(dāng)濃度的水溶液，然后取 0.5ml置于準(zhǔn)備盛血的器皿內(nèi)，再橫放蒸干（肝素不宜超過(guò)30℃），則抗凝劑在器皿壁上形成一層薄膜，使用時(shí)較為方便，效果較滿意。血漿：上述抗凝的全血在離心機(jī)中離心，所得的上清液即為血漿。如需用血漿進(jìn)行分析時(shí)，必須嚴(yán)格防止溶血，故采血時(shí)一切用具（注射器、針頭、試管等）皆需清潔干燥，取出的血液也不能劇烈振搖。血清：收集的血液不加抗凝劑，在室溫下放5~20分鐘即自行凝固。通常經(jīng)3小時(shí)，血塊收縮，析出清亮的血清。為了節(jié)省時(shí)間，必要時(shí)可離心分離血清。制備血清同樣須防止溶血。
無(wú)蛋白血濾液：分析血液中許多成分時(shí)，也常除去蛋白質(zhì)，制成無(wú)蛋白血濾液。如血液中的非蛋白氮、尿酸、肌酸等測(cè)定皆需先把血液制成無(wú)蛋白血濾液后，再進(jìn)行分析測(cè)定。蛋白質(zhì)沉淀劑如鎢酸、三氯醋酸或氫氧化鋅皆可用于制備無(wú)蛋白血濾液，可根據(jù)不同的需要而加以選擇。
（二）尿液樣品一般定性實(shí)驗(yàn)只需將尿收集一次即可，但一天之中各次排出尿液的成分隨食物、飲水及一晝夜的內(nèi)生理變化等的影響而有很大的差異，因此定量測(cè)定尿液中各種成分皆應(yīng)收集24小時(shí)尿混合后取樣。通常在早晨一定時(shí)間排出殘余尿而棄去，以后每次尿皆收集于清潔大玻瓶中，到第二天早晨同一時(shí)間收集最后一次尿即可，隨即混合并用量筒量準(zhǔn)其體積。收集的尿液如不能立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，則應(yīng)置于冷處保存。必要時(shí)可在收集尿時(shí)即于收集的玻瓶中加入防腐劑如甲苯、鹽酸等，通常每升尿中約加入5ml甲苯或5ml鹽酸即可。如須收集動(dòng)物尿液，可將動(dòng)物置于代謝籠中，其排出之尿液經(jīng)籠下漏斗流入瓶中而收集之。
（三）組織樣品離體不久的組織，在適宜的溫度及ｐH等條件下，可以進(jìn)行一定程度的物質(zhì)代謝。因此，在生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常利用離體組織，研究各種物質(zhì)代謝的途徑與酶系的作用，也可以從組織中提取各種代謝物質(zhì)或酶進(jìn)行研究。但是各種組織離體過(guò)久后，都要發(fā)生變化。例如，組織中的某些酶在久置后發(fā)生變性而失活。有些組織成分如糖原、ATP等，甚至在動(dòng)物死亡數(shù)分鐘至十幾分鐘內(nèi)，其含量即有明顯的降低，因此，利用離體組織作代謝研究或作為提取材料時(shí)，都必須迅速將它取出，并盡快地進(jìn)行提取或測(cè)定。一般采用斷頭法處死動(dòng)物，放出血液，立即取出實(shí)驗(yàn)所需之臟器或組織，去除外層的脂肪及結(jié)締組織后，用冰冷之生理鹽水洗去血液，必要時(shí)也可用冰冷之生理鹽水灌注臟器以洗去血液，再用濾紙吸干，即可作實(shí)驗(yàn)之用。取出的臟器或組織，可根據(jù)不同的目的，用以下不同的方法制成不同的組織樣品。組織糜：將組織用剪刀迅速剪碎，或用絞肉機(jī)絞成糜狀即可。組織勻漿：新鮮組織稱取重量后剪碎，加入適當(dāng)?shù)膭驖{制備液，用高速電動(dòng)勻漿器將組織研磨成勻漿。為了降低研磨產(chǎn)生的熱量，使組織及酶不致變性，制備勻漿時(shí)一般應(yīng)將玻璃勻漿管插入冰水浴中，適當(dāng)控制研磨的速度。玻璃勻漿管是一種特制的厚壁毛玻璃管和一個(gè)一端帶有磨砂玻璃杵頭的研磨桿組成。規(guī)格大小不一，使用時(shí)可根據(jù)需要進(jìn)行選擇。
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